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PCR實驗室如何處理污染情況

作者:京電港 來源:網站 2020-12-30 瀏覽量:192
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出現污染后,我們首先考慮可能是試劑的污染,更換新批號的HBV試劑重新檢測后,結果仍為全部標本陽性。
出現污染后,我們首先考慮可能是試劑的污染,更換新批號的HBV試劑重新檢測后,結果仍為全部標本陽性。 將HBV標本拿到其他正規的PCR實驗室檢測,結果標本中陰、陽性結果都有,陰性對照是陰性,陽性對照是陽性,說明標本沒有被污染將兩種批號的HBV試劑拿到其他正規的PCR實驗室檢測,也顯示試劑沒有問題。 我實驗室用消毒液擦拭工作臺面后,打開所有的紫外燈照射一天,將所使用微量進樣器、離心管、槍頭、手套、記號筆、記錄本等都更換掉,再將HBV標本進行檢測,結果全部標本仍然為陽性。 用消毒液擦拭工作臺面后,打開所有的紫外燈照射一天,將HBV標本重新檢測,同時設置了兩個陰性對照(A和B),A 陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,打開反應管的蓋子,在空氣中暴露10 min,蓋上蓋子,上機檢測;B陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,不開蓋子,直接上機檢測。結果是全部標本和A陰性對照為陽性,而B陰性對照為陰性。 至此,雖然還查找不到污染源是什么,但有一點可以肯定,PCR實驗室污染是氣溶膠擴散而引起的后來經過調查,發現污染是由于本室工一位工作人員在打掃實驗室衛生時,用擴增區的掃笤和拖把打掃了標本制備區的衛生引起。 在確定了污染的原因后,我們就開始著手排除污染,每天都打開整個PCR 實驗室的門窗和排氣扇,讓整個實驗室通風,用消毒液擦拭整個PCR實驗室,打開所有的紫外燈照射。 每隔3 d按3.5步驟檢測一次,一直這樣處理了一個月,A陰性對照才轉為陰性。連續檢測三次A和B陰性對照,每次結果都均為陰性,才確定PCR實驗室恢復正常。 通常我們對PCR實驗室污染的預防是采取隔離不同操作區、分裝試劑、改進實驗操作等規則,對污染的處理是用稀鹽酸擦拭或浸泡;紫外線照射法等。而對于實驗室的通風方面沒有給予足夠的重視,為了防止實驗區間之間的相互污染,各個實驗區間都是盡可能的密閉,從而使得實驗室出現PCR產物殘留污染的幾率增大。 從本次PCR實驗室污染排除的過程來看.我覺得污染得以排除的一個關鍵是通風。適當的給予實驗室通風,可起到空氣稀釋的作用,有利于PCR產物殘留量的減少,加快實驗室污染的排除。

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